✣ FISHLABCITOGENETICA / BANCO DI LAVORO
LABORATORIO DIGITALE

Dai canali al segnale.

Regola i livelli, isola i segnali e componi il merge.
Le tue immagini restano nel browser.

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Il tuo esperimento, a fuoco.

Carica i canali di una metafase oppure apri
le immagini di prova TWINS001.

Nessuna immagine caricataCursore: trascina per spostare
01 Carica i canali02 Livelli e selezioni03 Pseudocolore e merge

Un flusso familiare, canale per canale.

  1. Carica. Seleziona insieme da 2 a 4 immagini dello stesso campo: d = DAPI, c = Cy3, f = FITC, c5 = Cy5. Puoi correggere l’assegnazione manualmente.
  2. Zoom e spostamento. Scegli 100%, 200% o 400% dal menu Zoom. Con «Cursore» trascina l’immagine per esplorarla; nel merge puoi trascinare direttamente. Puoi anche usare le barre di scorrimento o il trackpad. Con gli strumenti di selezione, il tasto centrale del mouse permette di spostare senza disegnare.
  3. Regola. Seleziona il canale e modifica nero, gamma e bianco. Per il DAPI basta una regolazione leggera. “Originale” mostra i dati prima dell’elaborazione.
  4. Isola. Disegna rettangoli o ellissi attorno ai segnali, quindi attiva “Rimuovi fondo fuori selezione”. Una nuova selezione conserva automaticamente l’elaborazione precedente e la sostituisce. Per selezionare più segnali insieme attiva «Aggiungi alla selezione» oppure tieni premuto Maiusc. Con «Livelli solo nella selezione», nero, bianco e gamma modificano solo le aree selezionate. Premi «Applica e reisola» per conservare il risultato e iniziare un nuovo passaggio, tutte le volte che vuoi. La rimozione del fondo va attivata solo se vuoi azzerare tutto ciò che è fuori dalle nuove selezioni. «Ripristina» annulla tutti i passaggi del canale; «Originale» mostra sempre il file iniziale.
  5. Componi. Apri Merge: Cy3 rosso, FITC verde, Cy5 blu. Il DAPI è grigio al 100% per impostazione iniziale, con la stessa luminosità del canale fuori dai segnali. «Segnali in primo piano» dà priorità al colore nei punti di sovrapposizione. Puoi regolare separatamente DAPI e intensità dei segnali nel merge. Usa le caselle dei canali per includerli o escluderli.
  6. Esporta. Salva il PNG alla risoluzione originale e i parametri usati. I PNG esportati sono a 8 bit per colore. Chiudendo o ricaricando la pagina perderai il lavoro.

Le immagini devono avere le stesse dimensioni ed essere già registrate tra loro. Non è previsto l’allineamento automatico. I TIFF multipagina vanno separati prima del caricamento. Le selezioni sono maschere didattiche: non usarle per misurazioni quantitative sui dati originali.